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ELISA即酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定,ELISA試劑盒基于這一原理發(fā)揮作用。它主要利用抗原與抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)。在試劑盒中,酶被標(biāo)記在抗體或抗原上。首先將樣本(可能含有待測(cè)抗原或抗體)加入到預(yù)先包被有特異性抗體或抗原的微孔板中。如果樣本中存在目標(biāo)物質(zhì),就會(huì)與包被物結(jié)合。然后加入標(biāo)記的抗體或抗原,再次特異性結(jié)合。加入底物,被標(biāo)記的酶會(huì)催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)。通過(guò)檢測(cè)吸光度等方式,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以定量測(cè)定樣本中目標(biāo)物質(zhì)的含量。這種特異性結(jié)合和酶催化顯色的原理,使得ELISA試劑盒在生物檢測(cè)領(lǐng)域具有很高的靈敏度和特異性,能夠準(zhǔn)確檢測(cè)出微量的生物分子,如蛋白質(zhì)、、抗體等。上海伊麗薩生物科技,在進(jìn)口ELISA試劑盒代理方面經(jīng)驗(yàn)豐富。專注ELISA試劑盒價(jià)位
ELISA試劑盒研發(fā)中的底物優(yōu)化是提高檢測(cè)性能的重要環(huán)節(jié)。對(duì)于辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的試劑盒,常用的底物有TMB(四甲基聯(lián)苯胺)和ABTS(2,2-阿扎-雙-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸))等。TMB底物反應(yīng)后顏色變化明顯,從無(wú)色變?yōu)樗{(lán)色,在酸性條件下又會(huì)變?yōu)辄S色,便于比色檢測(cè)。ABTS底物反應(yīng)后產(chǎn)生綠色產(chǎn)物。在優(yōu)化底物時(shí),要考慮底物的反應(yīng)速度、靈敏度、穩(wěn)定性以及背景信號(hào)等因素。例如,通過(guò)改變底物的濃度、緩沖液的組成等條件,可以提高反應(yīng)速度和靈敏度,降低背景信號(hào),從而提高試劑盒的整體檢測(cè)性能。北京好的ELISA試劑盒進(jìn)貨價(jià)上海伊麗薩生物科技代理進(jìn)口ELISA試劑盒,助力科研探索。
操作方法:雙抗體夾心法1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌,下同)。2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。3.加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。4.加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。5.終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。6.結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。
ELISA試劑盒中的酶標(biāo)記物是實(shí)現(xiàn)檢測(cè)信號(hào)放大的關(guān)鍵因素。酶標(biāo)記在抗體或抗原上,常見(jiàn)的酶有辣根過(guò)氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP)等。酶標(biāo)記物的制備需要精確的技術(shù),要確保酶與抗體或抗原的結(jié)合既穩(wěn)定又不影響它們各自的活性。以HRP標(biāo)記的抗體為例,HRP具有高效的催化活性,在與目標(biāo)抗原或抗體特異性結(jié)合后,當(dāng)加入底物時(shí),HRP能夠催化底物發(fā)生大量的化學(xué)反應(yīng),從而將微弱的抗原-抗體結(jié)合信號(hào)放大為明顯的顯色信號(hào)。這種信號(hào)放大作用使得ELISA試劑盒能夠檢測(cè)到極低濃度的目標(biāo)物質(zhì),提高了檢測(cè)的靈敏度。上海伊麗薩生物科技,進(jìn)口ELISA試劑盒代理的服務(wù)者。
ELISA試劑盒在臨床診斷的傳染病檢測(cè)方面發(fā)揮著不可替代的作用。對(duì)于許多傳染病,如、梅毒、肝炎等,ELISA試劑盒可以檢測(cè)病原體的抗原或人體產(chǎn)生的抗體。以檢測(cè)為例,初篩時(shí)常用ELISA試劑盒檢測(cè)血液中的HIV抗體。這種檢測(cè)方法具有較高的靈敏度和特異性,能夠在后的窗口期后準(zhǔn)確檢測(cè)出抗體的存在。對(duì)于肝炎病毒的檢測(cè),ELISA試劑盒可以檢測(cè)乙肝病毒的表面抗原、e抗原等以及丙肝病毒的抗體等,有助于早期發(fā)現(xiàn)者,及時(shí)進(jìn)行干預(yù),防止疾病的傳播。進(jìn)口ELISA試劑盒,上海伊麗薩生物科技代理進(jìn)口,滿足科研需求。浙江名優(yōu)ELISA試劑盒器材
進(jìn)口ELISA試劑盒,上海伊麗薩生物科技代理的產(chǎn)品值得擁有。專注ELISA試劑盒價(jià)位
ELISA試劑盒在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中也扮演著重要角色。以有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測(cè)為例,由于有機(jī)磷農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中普遍使用,其殘留可能會(huì)污染農(nóng)產(chǎn)品。ELISA試劑盒的微孔板可以固定有針對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的特異性抗體。當(dāng)農(nóng)產(chǎn)品樣本中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留與抗體結(jié)合后,再經(jīng)過(guò)酶標(biāo)記和底物反應(yīng),就能夠檢測(cè)出農(nóng)藥殘留量。這種檢測(cè)方法具有快速、簡(jiǎn)便、成本相對(duì)較低等優(yōu)點(diǎn),能夠在農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)入市場(chǎng)前對(duì)其進(jìn)行大規(guī)模篩查,保障農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全,減少因農(nóng)藥殘留對(duì)人體健康的潛在威脅。專注ELISA試劑盒價(jià)位